Imagens de células vivas de quinases receptoras ativadas por ligantes que são marcadas com uma proteína fluorescente podem fornecer informações valiosas sobre o mecanismo pelo qual tal receptor transduz o sinal que percebe na superfície da célula em uma resposta celular. Esta abordagem tem sido utilizada para análise de várias quinases semelhantes a receptores de plantas da classe de receptores ricos em leucina. No entanto, ainda não foi aplicado com sucesso à quinase do receptor S-locus ou a qualquer outro membro da classe S-domain de RLKs.
Um artigo recente em Annals of Botany descreve a expressão e imagens de células vivas de versões funcionais marcadas com FP do A.lyrata SRKb variante em A. thaliana células epidérmicas do estigma. A marcação FP bem-sucedida de SRK e sua visualização em células epidérmicas do estigma vivo sugerem novas abordagens para análises futuras da dinâmica dos complexos proteicos SRK e SRK-SCR. Por exemplo, deve ser possível visualizar SRK de comprimento total marcado com cYFP em conjunto com proteínas SCR marcadas com um marcador fluorescente diferente e, assim, determinar conclusivamente se SRK é realmente internalizado após sua interação com seu ligante SCR.
Rea, AC e Nasrallah, JB (2015) Imagens in vivo da quinase do receptor S-locus, o determinante da especificidade feminina da autoincompatibilidade, em Arabidopsis thaliana autoincompatível transgênica. Annals of Botany, 24 de fevereiro de 2015 doi: 10.1093/aob/mcv008
O S-locus receptor quinase (SRK), que é expresso nas células epidérmicas do estigma, é responsável pelo reconhecimento e inibição do 'próprio' pólen na resposta de autoincompatibilidade (SI) das Brassicaceae. Acredita-se que a interação alelo-específica de SRK com seu ligante cognato localizado no revestimento de pólen, a proteína rica em cisteína S-locus (SCR), desencadeie uma cascata de sinalização dentro da célula epidérmica do estigma que leva à parada do pólen "próprio". na superfície do estigma. Além do receptor SRK de sinalização de comprimento total, as células epidérmicas do estigma expressam duas outras espécies de proteínas SRK que não possuem o domínio quinase e cujo papel na resposta SI não é compreendido: uma versão solúvel do ectodomínio SRK designada eSRK e uma forma designada tSRK. O objetivo deste estudo foi descrever a distribuição subcelular das várias espécies de proteínas SRK nas células epidérmicas do estigma como um prelúdio para visualizar a dinâmica do receptor em resposta à ligação SCR.
O método da Arabidopsis lyrata A variante SRKb foi marcada com a variante Citrina da proteína fluorescente amarela (cYFP) e expressa em A. thaliana plantas do acesso C24, que demonstraram exibir uma resposta SI robusta após a transformação com o par de genes SRKb-SCRb. Os transgenes utilizados neste estudo foram projetados para produção diferencial e visualização das três espécies de proteínas SRK em células epidérmicas do estigma. Estigmas transgênicos foram analisados por ensaios de polinização e microscopia confocal.
Ensaios de polinização demonstraram que as proteínas SRK marcadas com cYFP são funcionais e que a eSRK não é necessária para SI. A análise microscópica confocal das proteínas SRK marcadas com cYFP em células epidérmicas do estigma vivo revelou a localização subcelular diferencial das três espécies de proteínas SRK, mas não mostrou evidências de redistribuição dessas proteínas subsequentes à polinização incompatível.
