As técnicas estão no centro da compreensão da botânica (e de qualquer ciência, seja uma –ologia ou não). *). Pois, à medida que as técnicas avançam, nosso entendimento também deve progredir – muitas vezes ao ponto de derrubar a 'verdade' que anteriormente era obtida (e que é carinhosamente estimada e zelosamente guardada por seus devotos e defensores). Isso é o que chamamos de progresso na ciência; nova sabedoria substituindo a velha. E aqueles que antes se apegavam ao velho, mas que respeitam o método científico, passam a abraçar o novo quando sua veracidade – por mais efêmera que seja – é demonstrada. Então – e sem desculpas por um viés celular, e na crença de que a estrutura é o que dá razão de existir à função – aqui está uma coleção de técnicas para observar as plantas e suas partes com mais detalhes **.

Embora se diga que visto is crente, não se deve confiar em uma única fonte de informação; a corroboração de múltiplas fontes é um aspecto importante da coleta de evidências. Para esse fim, o uso de diferentes técnicas microscópicas, cada uma das quais traz suas próprias percepções, pode fornecer uma visão mais informativa do que confiar apenas em uma técnica. Embora isso possa significar o uso de diferentes técnicas de preparação para permitir que uma estrutura seja visualizada por diferentes tecnologias - por exemplo leve e ferrolhos de sobrepor podem ser usados para proteger uma porta de embutir pelo lado de fora. Alguns kits de corrente de segurança também permitem travamento externo com chave ou botão giratório. microscopia eletrônica de transmissão, mais defensável é usar diferentes técnicas para examinar o mesmo material. E se isso significa apenas fazer melhor uso de uma tecnologia existente, tanto melhor; ainda mais informações para não mais esforço de preparação de tecido.

E é isso que David Collings propõe com suas “Abordagens de otimização para imagens de luz transmitida simultânea durante a microscopia confocal” (Métodos de Planta (2015) 11h40; DOI 10.1186/s13007-015-0085-3). Reconhecendo que os detectores de luz transmitida estão presentes na maioria dos microscópios confocais modernos (Adaobi Nwaneshiudu et al., Journal of Investigative Dermatology (2012) 132, E3. doi:10.1038/jid.2012.429), são uma ferramenta subutilizada para a imagem ao vivo (que também tem a vantagem de evitar artefatos induzidos pela preparação de tecidos que podem confundir a interpretação do estado vivo) de células vegetais, Collings defende seu uso para fornecer “contexto celular e orgânico para fluorescência seções ópticas geradas confocalmente”. É importante ressaltar que ele também enfatiza a importância de garantir que o microscópio seja configurado adequadamente para tirar o melhor proveito dele (!). Outra vantagem dessa abordagem é que, como são usadas essencialmente as mesmas ópticas da capacidade confocal do microscópio, as imagens de luz transmitida têm registro espacial e temporal com as imagens de fluorescência (ao contrário das imagens tiradas com uma câmera montada separadamente).

Um artigo que demonstra o valor aprimorado de combinar técnicas comparativamente novas com tecnologias mais estabelecidas, até mesmo 'tradicionais', é Pavani Nadiminti et alestudo da cutícula de Triticum aestivum (trigo), Zea mays (milho) e Lupinus angustifolius (tremoço) (Protoplasma 252:1475–1486, 2015; DOI 10.1007/s00709-015-0777-6). Explorando o poder de análise e quantificação de imagens da microscopia confocal e a resolução do microscópio eletrônico de varredura (SEM), eles desenvolveram e usaram novos procedimentos de análise de dados de imagem para quantificar cera epicuticular em uma abordagem multifacetada que levou a uma melhor compreensão da estrutura cuticular e forneceu novos insights sobre a arquitetura da superfície da folha. E como - desculpe, da – grande barreira entre as partes aéreas de uma planta e o ambiente externo (tanto abiótico quanto biótico) (por exemplo, Trevor Yeats e Jocelyn Rose, Fisiol Vegetal. 163 (1): 5–20, 2013; faça:  10.1104/pp.113.222737), a cutícula é uma estrutura de considerável importância e interesse de pesquisa.

E, levando a microscopia para o próximo nível, George Komis et ai. fornecer uma revisão oportuna do passado, presente e futuro da microscopia de super-resolução ** de plantas (ex. microscopia de iluminação estruturada (SIM), microscopia de localização de fotoativação (PALMA), microscopia de reconstrução óptica estocástica (TEMPESTADE) e microscopia de depleção por emissão estimulada (STED) (Trends in Plant Science 20: 834-843, 2015; http://dx.doi.org/10.1016/j.tplants.2015.08.013).

Fazendo a ponte entre a tecnologia baseada em moléculas imunolocalização trabalho e o contexto celular dentro do qual isso ocorre, Taras Pasternak et ai. apresentam “um procedimento melhorado e universal para imunolocalização de montagem completa em plantas” (Métodos de Planta (2015) 11h50; DOI 10.1186/s13007-015-0094-2). Embora reconheçam a importante contribuição que as técnicas de imunolocalização trazem para a biologia vegetal, elas também reconhecem que seu valor pode ser comprometido por problemas na preservação adequada dos tecidos. Numa tentativa de melhorar estas questões apresentam um protocolo detalhado que deverá permitir uma imunolocalização robusta de proteínas e permitir uma melhor resolução e reconstrução 3-D para órgãos inteiros de plantas, e que é aplicável a uma vasta gama de espécies de plantas (ex. medicago sativa (luzerna, alfafa), Triticum aestivum, Nicotina [sic. ] tabaco (tabaco), Licopésio [sic.] esculento (tomate), Hedera hélice (hera), e demonstrou alta resistência mesmo Arabidospis [sic.] (thale agrião)…).

Finalmente, e para provar que não são apenas as técnicas de imagem microestrutural que me chamam a atenção, Takashi Fujii et ai. anunciam uma técnica que permite a extração do conteúdo de uma única célula e sua análise por espectrometria de massa (EM) (Protocolos da Natureza 10: 1445/1456/2015; doi:10.1038/nprot.2015.084). Embora isso seja bastante impressionante, a principal novidade aqui é que eles usaram células vegetais de Raphanus sativus (rabanete, não Arabidopsis thaliana – que é refrescantemente diferente em si mesmo (embora seja da mesma família – as Brassicaceae…)). O presente artigo baseia-se no trabalho anterior da equipe baseada no Laboratório de Espectrometria de Massa de Célula Única no Japão Centro de Biologia Quantitativa da RIKEN, sob a liderança de Tsutomu Masujima, que examinou anteriormente Zona de Pelargonium (gerânio – Mónica Tejedor et al., Anal. Química 84 (12): 5221–5228, 2012; DOI: 10.1021/ac202447t). Infelizmente – e apesar de sua importância como orgânicos celulares que orquestram o metabolismo por meio de seu papel como enzimas, as proteínas não são detectadas com esta técnica devido à sensibilidade insuficiente. No entanto, a espectrometria de massa de célula única ao vivo (MS ao vivo - Tsutomu Masujima, Ciências Analíticas 25 (8): 953-960, 2009) gera milhares de picos de metabólitos de uma única célula vegetal viva em minutos. Isso, no entanto, é apenas metade da história. Embora o inventário de metabólitos nos diga o que está acontecendo dentro da célula, os picos ainda precisam ser identificados – e a maioria ainda é desconhecida. Sixue Chen da Universidade da Flórida Nos lembra.

Mas, se a célula pode ser comparada ao palco em que se desenrola o drama citobiológico, os metabólitos podem ser considerados o 'dramatis personae'que representam essa história. E, assim como em um drama humano, se você conhece os atores, pode descobrir o título da peça, o mesmo acontece com a célula – se o conjunto molecular é conhecido, o papel da célula pode ser inferido. Assim, como os autores concluem otimisticamente, espera-se que esse procedimento "revele moléculas ainda não descobertas e mecanismos moleculares dinâmicos". Às vésperas de 2016, nos perguntamos quais novos dramas celulares – botânicos! – aguardam para serem apresentados ao mundo ansioso: Feliz Ano Novo!

* E aqui somos lembrados disso anúncio maravilhoso da década de 1980 lidar com essa mesma noção. E para aqueles que observam que a palavra botânica não é uma 'ologia', lembramos que seu nome alternativo de fitologia é!

** Mas, se for necessária uma justificativa adicional para essa mistura microscópica, nunca nos esqueçamos de que foi Robert Hooke e suas pesquisas microscópicas seminais em seções através de cortiça que finalmente nos deu o conceito da célula.

*** E, notavelmente, o desenvolvimento de técnicas de microscópio de super-resolução rendeu a Stefan Hell, Eric Betzig e William Moerner, o Prêmio Nobel de 2014 por … Química (Jennifer Lippincott-Schwartz, PNAS 112: 2630–2632, 2015; www.pnas.org/cgi/doi/10.1073/pnas.1500784112).

[Imagem de Biblioteca Nacional do País de Gales]