Microtécnicas e protocolos vegetais

Editado por Edward Yeung, Claudio Stasolla, Michael Summer e ferrolhos de sobrepor podem ser usados para proteger uma porta de embutir pelo lado de fora. Alguns kits de corrente de segurança também permitem travamento externo com chave ou botão giratório. Bing Huang. Primavera, 2015.

Como alguém que tem lutado com protocolos publicados para adaptá-los para que funcionem para o meu material de escolha biológica de células vegetais - o citoesqueleto dentro do desenvolvimento do xilema secundário e floema das raízes das árvores (Chaffey et al., 1997) – Aprecio a importância da orientação detalhada, fácil de usar e passo a passo daqueles que desenvolveram as técnicas. Essa experiência inspirou a produção do 'wood cook book', que apresenta uma ampla variedade de técnicas e protocolos detalhados para o estudo da biologia celular e molecular da formação da madeira nas árvores (Chaffey, 2002a). Embora existam protocolos e metodologias publicados para estudo microscópico de tecidos vegetais menos exigentes - por exemplo, Johansen (1940), Sass (1958), Jensen (1962), Berlyn e Miksche (1976), O'Brien & McCully (1981), Gahan (1984 ) e Ruzin (1999) – muitos deles não estão mais disponíveis. Há também um desejo compreensível de garantir que os métodos sejam relevantes para 21^st praticantes do século da microtécnica vegetal. E esse é um dos drivers para Yeung et allivro de . Microtécnicas e protocolos vegetais [doravante referido como PMP], que é uma coleção de “uma ampla variedade de aplicativos e os atualiza para torná-los compreensíveis e relevantes, especialmente para alunos que usam os métodos pela primeira vez". PMP não se dedica à arte da microtécnica da madeira (embora dedique três de seus 30 capítulos especificamente às idiossincrasias desse material). Em vez de, PMP pretende fornecer protocolos e procedimentos comprovados para um usuário mais generalista, que provavelmente preferiria investigar as complexidades de tais sistemas como Arabidopsis (que não é menos interessante ou digno de estudo do que árvores, mas geralmente mais passível de estudo microtécnico).

Avaliação

Of PMPDas 576 (+ xiv) páginas, 570 delas são dedicadas a 30 capítulos de técnicas, que são contribuições de mais de 50 praticantes. Esses capítulos são agrupados em quatro seções; começando com geral – mas bastante importante! – considerações sobre “Fixação, processamento, incorporação e coloração de espécimes botânicos”, antes de tratar de “Microtécnica relacionada a estudos celulares e moleculares”, “Métodos preparativos para o estudo da anatomia da madeira” e “Técnicas e protocolos botânicos para arqueologia e herbário coleção". E cada uma das metodologias parece bastante detalhada (na medida em que há alguma repetição entre os diferentes capítulos – mas como provavelmente só se lê o capítulo de interesse, isso provavelmente passará despercebido e garante que cada contribuição seja verdadeiramente autônoma e completa em em si…), o que é bom, e como deveria ser em um volume tão prático e prático.

As contribuições também incluem menções apropriadas a questões de saúde e segurança, seja dentro ou fora do laboratório, por exemplo, em sítios arqueológicos. Mas talvez também seja importante dizer por que a perna da calça [presumivelmente significa calças para leitores do Reino Unido...] deve cobrir a parte superior da bota (p. 133) – para impedir que o nitrogênio líquido ultrafrio, prejudicial aos tecidos, chegue dentro da bota e ferir a perna ou o pé! E, embora cobrir uma borda de uma lâmina de barbear de dois gumes com uma única camada de fita adesiva (pp. 12/13) provavelmente seja suficiente para parar um aluno acidentalmente cortando um dedo(!), danos graves ainda podem ocorrer. Então, talvez sejam necessárias mais algumas camadas de fita para garantir a segurança? Mas as verdadeiras joias das metodologias são as “Notas” e as seções de solução de problemas. Fornecidos pelos próprios profissionais, eles dão vida aos protocolos e podem economizar muitas horas de frustração se você tentar descobrir por que um método falhou por conta própria. De fato, sem essas sugestões e dicas, a tentação de muitos é abandonar as técnicas se elas não funcionarem tão prontamente, o que pode significar ainda menos trabalhadores realizando esse tipo de investigação. Geralmente, há uma seção de Interpretação e Conclusão ou Conclusão ou Comentários Gerais no final do capítulo, que geralmente fornece palavras de encorajamento sobre as técnicas do capítulo para futuros praticantes.

O livro termina com quatro páginas de índice de 2 colunas. E, sim, a Arabidopsis tem várias entradas nela. Mas, os únicos outros táxons indexados são Bienertia sinuspersici, Brassica napus, Kalanchoe, Oryza sativa e ferrolhos de sobrepor podem ser usados para proteger uma porta de embutir pelo lado de fora. Alguns kits de corrente de segurança também permitem travamento externo com chave ou botão giratório. Suaeda aralocaspica. Eu sei que muitas outras espécies foram mencionadas no texto. Uma lista separada de espécies usadas nos vários protocolos teria sido útil – para encorajar os fitocuriosos a investigar suas próprias espécies de interesse – porque o Índice não ajuda muito nesse sentido. As várias técnicas geralmente recebem boas menções no índice, mas podem ser facilmente observadas nos títulos dos capítulos (ao contrário das espécies...).

Imagens em preto e branco e coloridas ajudam a ilustrar muitas das contribuições, e algumas das multicoloridas – por exemplo, fluorescência, seções coradas cortadas à mão e renderizações de tomografia – foram muito impressionantes. No entanto, não sabia que as imagens indicam a publicação em que aparecem. Talvez tenham sido criadas especificamente para este livro? Suspeito que não em todos os casos, então seria útil ter esse link para a literatura publicada – como evidência extra do que pode ser alcançado com as técnicas.

As referências são fornecidas no final de cada capítulo (há um limite de quanto mesmo o protocolo mais detalhado deve repetir do que já é de domínio público, afinal). No entanto, eles não estão listados em ordem de autor, mas em ordem numérica (conforme citado no texto). A referência de Harvard – especialmente no texto – teria sido um alívio abençoado das listas de protocolos com muitos números. Mas alguns itens estranhos estão incluídos nas Referências, por exemplo, Chinnappa CC (1980) Botany 441: Manual de laboratório de taxonomia de plantas com flores. Universidade de Calgary e Mitrow G (2014) Comunicação pessoal. Certamente deve ser uma regra de ouro que as listas de referências incluam apenas itens que estão disponíveis publicamente. Eu tentei muito localizar o primeiro item na internet – e falhei. Esse item não pode, portanto, ser realmente considerado disponível para todos. Quão importante é entender o capítulo relacionado eu nunca saberei. Da mesma forma, uma comunicação pessoal é o que diz, uma comunicação que foi pessoal para as duas partes; tais itens, por sua própria natureza, não estão disponíveis para acesso a outros e nunca devem figurar em listas de referências.

Menções de alguns capítulos…

Embora o espaço não permita a cobertura de todos os protocolos da coleção, alguns merecem comentários adicionais.

Capítulo 1 “Um guia para o estudo da estrutura vegetal com ênfase em espécimes vivos” de Yeung: foi um prazer ver a técnica de seccionamento à mão livre receber um grande impulso nesta contribuição. E uma menção de Peterson et ai. (2008), que dá ainda mais detalhes sobre a técnica e o que é possível. E bom também ver uma promoção semelhante no cap. 10 “Métodos aprimorados para limpeza e coloração de amostras de plantas” por Lux et al. O corte manual é tão rápido – e barato! – maneira de obter resultados e fornecer uma entrada no mundo da microtécnica vegetal que é uma pena que pareça tão pouco usada. Ainda mais quando o que é possível é tão bem apresentado em Kraehmer H e Baur P (2013).

O Capítulo 2 “Fixação Química e Física de Células e Tecidos: Uma Visão Geral” (Huang e Yeung) deve ser mencionado porque perpetua o mito de que blocos de tecido com lados não maiores que cubos de 1 mm são necessários para refixação para microscopia eletrônica de transmissão. Isso não é verdade para materiais lenhosos – onde algumas células podem ter mais de 3 mm de comprimento (por exemplo, Chaffey, 2002b) e, até certo ponto, contradiz PMPdo Cap. 24 “Imagiologia Tridimensional do Câmbio e Células do Xilema Secundário por Microscopia Confocal de Varredura a Laser” por Nakaba et ai. re estudos de madeira onde são usadas lascas de 30 x 10 x 2 mm. Eu sei PMP não se trata apenas de tecidos lenhosos, mas essa ressalva merece ser mencionada.

Simplesmente porque não me lembro de ter visto muitos detalhes sobre a técnica em nenhum outro lugar, foi bom ver o cap. 20 “Microdissecção a laser de tecidos vegetais” de Millar et ai. Indivíduo. 22 “Exame microscópico da madeira: preparação de amostra e técnicas para microscopia de luz” fornece uma grande adição e desenvolvimento de um capítulo semelhante de Chaffey (2002c). Além disso, é sempre bom ver tecidos lenhosos reconhecidos pelos desafios técnicos que representam e receber menção apropriada em um volume de microtécnica vegetal mais generalista.

Algumas coisas que seriam úteis em um manual de microtécnicas

Como os editores reconhecem no Prefácio, PMP não é uma lista completa de métodos de microtécnica vegetal (abrindo assim o caminho para edições futuras atualizadas...), então seria grosseiro da minha parte listar todos os tópicos que gostaria de ver em tal livro. No entanto, uma seção que teria sido útil é aquela que trata da questão do registro e preparação de imagens para publicação. A imagem é tudo na microtécnica e muitas vezes representa o resultado principal de um projeto de pesquisa. Dado o número de retratações de artigos publicados devido à 'manipulação' de imagem (por exemplo, Martin e Blatt, 2013; http://retractionwatch.com/2016/02/24/dont-trust-an-image-a-new-company-can-help/), um capítulo que estabeleça o que é permitido – e o que não é – seria oportuno. Mencionei a utilidade de uma lista de táxons acima. Embora os endereços dos colaboradores sejam fornecidos, os endereços de e-mail não são. Embora possam mudar - assim como os endereços físicos dos autores - eles seriam extremamente úteis se os possíveis usuários das técnicas tivessem dúvidas que gostariam de levantar com os provedores do protocolo. Este é um gesto relativamente simples que pode ajudar a garantir uma aceitação mais ampla da microtécnica vegetal (e declaradamente um dos objetivos do livro).

Conclusão

A ampla área da microtécnica vegetal é um paraíso para os inovadores e as técnicas continuarão a melhorar ou serão modificadas para atender às necessidades de diferentes materiais vegetais e objetivos específicos de pesquisa. PMP não é, portanto, nem a última – nem necessariamente a última – palavra sobre o assunto – como o Protoplasma Edição Especial sobre Técnicas Emergentes em Microscopia Eletrônica e de Luz (Borst e Robinson, 2014). E, encorajador, há um interesse saudável no desenvolvimento de protocolos para microtécnica vegetal, conforme exemplificado por sites como Protocolos da Natureza, troca de protocolo, Métodos de planta BMC e Protocolos Springer. Microtécnicas e protocolos vegetais é, no entanto, uma coleção importante e bem-vinda de protocolos que capturam o estado atual de parte da arte.

No entanto, o verdadeiro teste de PMP é o quão bem ele será usado – e citado! – por pesquisadores do futuro. Portanto, e como alguém que esteve envolvido em um projeto semelhante que buscou incentivar mais interesse especificamente na biologia celular de plantas de madeira, desejo a Yeung et ai. bem em seu esforço digno de desenvolver a próxima geração de cientistas de plantas de mentalidade estrutural.

Referências

Berlyn GP e Miksche JP (1976) Microtécnica Botânica e Citoquímica. Editora da Universidade Estadual de Iowa.

Borst JW e Robinson D (2014) Editorial para PROTOPLASMA — Edição Especial em Microscopia. Protoplasma 251: 273-275.

Chaffey NJ (ed.) (2002a) Formação de madeira em árvores: Técnicas de biologia celular e molecular. Taylor e Francisco.

Chaffey NJ (2002b) Uma introdução aos problemas de trabalhar com árvores. Em: Formação de madeira em árvores: Técnicas de biologia celular e molecular, ed. Chaffey NJ, pp. 9-16. Taylor e Francisco.

Chaffey NJ (2002c) Técnicas microscópicas de madeira. Em: Formação de madeira em árvores: Técnicas de biologia celular e molecular, ed. Chaffey NJ, pp. 17-40. Taylor e Francisco.

Chaffey NJ, Barnett JR e Barlow PW (1997) Visualização do citoesqueleto dentro do sistema vascular secundário de espécies de madeira dura. Revista de Microscopia 187: 77-84.

GahanPB (1984) Histoquímica e citoquímica vegetal – Uma introdução. Imprensa Acadêmica.

Kraehmer H e Baur P (2013) Anatomia da erva. Wiley-Blackwell.

Jensen WA (1962) Princípios e prática da histoquímica botânica. WH Freeman e companhia

Johansen DA (1940) Plant microtécnica, 1ª ed.. McGraw-Hill Book Co.

Martin C e Blatt M (2013) Manipulação e Má Conduta no Manuseio de Dados de Imagem. A célula vegetal 25: 3147-3148.

O'Brien TP e McCully ME (1981) O estudo dos princípios da estrutura da planta e métodos selecionados. Termacarphi Pty Ltd.

Peterson RL, Peterson CA e Melville LH (2008) Ensinando anatomia vegetal por meio de exercícios de laboratório criativos. NRC Press, Canadá.

Ruzin SE (1999) Microtécnica vegetal e microscopia. Imprensa da Universidade de Oxford.

Sass JE (1958) Microtécnica botânica, 3ª ed.. Constable e Companhia Ltda.